細胞計數板是一種常用的細胞計數工具,醫(yī)學上常用來計數紅細胞、白細胞等而得名,也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數量,是一種常見的生物學工具。
細胞計數板使用方法:
1、視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數可數為度。
2、取潔凈的血球計數板一塊,在計數區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
3、將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區(qū),勿使氣泡產生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區(qū)上(不要使計數區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。
4、靜置片刻,使細胞沉降到計數板上,不再隨液體漂移。將血球計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計數區(qū)后,再轉換高倍鏡觀察并計數。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度。
5、計數時若計數區(qū)是由16個中方格組成,按對角線方位,數左上、左下、右上、右下的4個中方格(即100小格)的菌數。如果是25個中方格組成的計數區(qū),除數上述四個中方格外,還需數中央1個中方格的菌數(即80個小格)。為了保證計數的準確性,避免重復計數和漏記,在計數時,對沉降在格線上的細胞的統(tǒng)計應有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,計數時則數上線不數下線,數左線不數右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格,本格的下線和右線上的細胞按規(guī)定計入相應的格中。見右圖:即本格中計數細胞為3個。
6、對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數量。
7、測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,放入盒內保存。